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细胞培养方法步骤

来源: 上海博湖生物科技有限公司 >> 进入该公司展台 2021/11/15 15:34:30 已浏览:
导读:细胞培养方法步骤

培养方法如下:
1、将细胞稀释到1000个细胞/mL,接种到24孔板,每孔1ml。
2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。
3、每隔3天跟换1次培养液,保持G418浓度不变。
4、选择出在10~14天内使全部死亡的G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同,一般变动在100ug/ml~1000ug/ml范围。
培养步骤:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养*(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养*。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

(1)、 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

(2)、 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

(3)、轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
(4)、 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法三:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入到冻存液中。
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