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核酸检测试剂盒叫荧光PCR探针法。
试剂盒里分好几部分,*重要的是PCR反应体系:DNA聚合酶,镁离子,引物(新冠测2个基因和1个内标需要3对引物),探针(也要3对探针,发出三种波长的荧光),逆转录酶,dNTP(ATUCG会用部分U代替T),还有用于抗干扰的UDG酶(正常的DNA只有ATCG,PCR扩增出来的DNA会有AT(会用部分U代替T)CG,这样扩增出来的DNA链中有U,UDG酶能切断含U的DNA链,所以扩增DNA在空气中形成的气溶胶,不会影响其他样本)、RNA酶抑制剂(空气中液体里全都是RNA酶,会降解病毒的RNA)、Taq酶的抗体(Hot start,常温下能抑制Taq酶的活性,PCR扩增时高温让其失活,Taq酶就在高温时恢复活性开始扩增了)。
还有阴阳性对照,阴性为水,阳性通常的合成的DNA,新冠的N基因和ORFlab基因和内标基因。
内标的作用通常为人的基因,所有的样本结果内参基因有扩增曲线,否则无效。
反正流程:核酸提取,逆转录,cDNA高温95℃变性(同时Taq酶的抗体失活),剩下变性到退火延伸很多次循环,*就得到结果了。荧光PCR仪的作用在扩增的同时能够监测探针的发光,得知扩增后DNA的量。
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