采用TSKgel G5000PWXL色谱柱分离重组SARS-CoV-2 S蛋白

SARS-CoV-2属于冠状病毒科、β冠状病毒属，是一种球形、有包膜的单正链RNA病毒。主要编码4种结构蛋白：刺突糖蛋白 (spike glycoprotein, S蛋白)、包膜蛋白 (envelope protein, E蛋白)、膜蛋白 (membrane protein, M蛋白)、核衣壳蛋白 (nucleocapsid protein, N蛋白)。

S蛋白是*冠状病毒*重要的表面蛋白，是中和病毒感染抗体的主要靶点，也是疫苗设计的核心免疫原成分。S蛋白由S1和S2亚基组成，其中白受体结合域 (RBD) 位于S1亚基。本篇应用是对昆虫细胞中表达并纯化得到的重组SARS-CoV-2 S蛋白及片段S1蛋白和RBD蛋白进行高效尺寸排阻色谱 (HPSEC) 的分离和表征。

样品制备  

重组SARS-CoV-2 S蛋白及片段S1蛋白、RBD蛋白参考方法制备。

分析条件  

色谱柱：TSKgel G5000PWXL (10μm, 7.8 mmI.D.×30 cm)

流动相：10 mM PB (pH 7.4)

流速：0.5 mL/min

柱温：室温

检测器参数：UV@280 nm

样品：重组S蛋白及S1蛋白、RBD蛋白

分析结果  

结果与讨论  

采用高效凝胶色谱柱TSKgel G5000PWXL对纯化后重组SARS-CoV-2 S蛋白及片段RBD、S1溶液进行了分离。实验结果表明：该色谱柱可有效实现纯化后重组SARS-CoV-2 S蛋白、S1蛋白及RBD蛋白的分离。RBD、S1和S在洗脱体积分别为9.0 mL、5.5 mL和5.3 mL的HPSEC谱图上均显示一个主峰。