操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品名称	规格	保存	货号
纤毛内转运蛋白20纤毛内转运蛋白20染料法荧光定量PCR试剂盒	50次	负20度	BH-P63693

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

使用方法：

一、样品DNA的制备

用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。

二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。

3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。

4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。

5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。

6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。

7. NC管中不加任何阳性对照。

8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR

ATP酶检测试剂盒硝酸铋(III) 五水合物 ≥99.99% ls basisBOC-L-3,4-二氯苯氨酸 98%TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3)  转移生长因子–β3（抗原）

色素氧化酶检测试剂盒硝酸铋(III) 五水合物 ≥99.995% ls basisBOC-D-3,4-二氯苯氨酸 98%TGF- Beta R2 peptide  转移生长因子β受体2（多肽抗原）

赤霉素53检测试剂盒咖啡酸 98%BOC-L-2-氯苯氨酸 98%Thymosin Alpha-1  胸腺肽 α-1 （胸腺肽-Thymosin alpha-1）

P型ATP酶检测试剂盒咖啡酸 99%BOC-D-2-氯苯氨酸 98%Caspase-12  半胱酸蛋白酶蛋白-12(多肽)

原叶绿素酸酯氧化还原酶检测试剂盒咖啡酸 分析标准品4-溴-2-甲氧基苯酚 98%Caspase-12(hunman)  半胱酸蛋白酶蛋白-12抗原(人)

芋头花叶病检测试剂盒4-香豆酸 98%N-BOC-L-苯氨 97%TmR2(GDNFR Beta；TRN-R；GFR-alpha-2；NTNR-2)  胶质系源性神经营养因子（多肽）

木酚素检测试剂盒4-香豆酸 分析标准品，≥99%Boc-L-炔基甘氨酸 98%TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha)  人肿瘤坏死因子-α（多肽抗原）

壁转化酶检测试剂盒卡铂 98%三氟磺酸铋 99%TRA16 (Testicular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associated protein)  激素受体相关蛋白

液泡转化酶检测试剂盒顺铂 Pt, 65%N-Boc-D-苯氨 98%Tranthyretin  甲状腺素运载蛋白（抗原）

甘薯潜隐病检测试剂盒阿魏酸乙酯 97%三氟甲磺酸钙 99%TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A)  神经生长因子的一种（抗原）

反玉米素检测试剂盒反式-阿魏酸 99%三氟甲磺酸铈 98%TrK A.B.C   神经生长因子的一种（抗原）

反式玉米素核苷检测试剂盒4-甲氧基肉桂酸 99%6-氯-3-甲基尿嘧啶 98%active Caspase 3(caspase-3 p12 subunit)  活化半胱酸蛋白酶蛋白-3抗原

磺基转移酶检测试剂盒乳清酸一水合物 98%三氟磺酸镝 98%CASP4(Caspase-4)  半胱酸蛋白酶蛋白-4抗原

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测试剂盒锰 SP,粉末1,4-二溴萘 98%Trk B  神经生长因子受体的一种（抗原）

8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶检测试剂盒金属锰片  99.9% ls basis,不规则片状2,6-二溴萘 99%Trk B  神经生长因子受体的一种（抗原）
纤毛内转运蛋白20纤毛内转运蛋白20染料法荧光定量PCR试剂盒小鼠血管内皮生长因子D(VEGF-D)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IKBKB(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta) ELISA KitT调控相关蛋白抗体

小鼠血管内皮生长因子受体3(VEGFR3/Flt4)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ROMO1(Reactive oxygen species modulator 1) ELISA Kit突触后蛋白CRIPT抗体

小鼠血管内皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)酶联免疫吸附测定试剂盒Human THRA(Thyroid hormone receptor alpha) ELISA Kit钙粘附蛋白8抗体

小鼠血管活性肠肽(VIP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FH(FumaRate hydRatase, mitochondrial) ELISA Kit6号染色体开放阅读框174抗体

小鼠V-Fos FBJ骨髓瘤病癌基因同源物(FOS)酶联免疫吸附测定试剂盒Human GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) ELISA Kit6号染色体开放阅读框150抗体

小鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA KitX染色体开放阅读框56抗体

小鼠内脂素/内脏脂肪素(VF)酶联免疫吸附测定试剂盒Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA Kit9号染色体开放阅读框152抗体