实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR

产品名称	规格	保存	货号
禽脑脊髓炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒	50次	负20度	BH-P63667

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

使用方法：

一、样品DNA的制备

用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。

二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。

3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。

4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。

5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。

6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。

7. NC管中不加任何阳性对照。

8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

硝酸还原酶检测试剂盒2-氯噻吩 96%甘草酸铵盐 97%PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide)  蛋白酶激活受体-2桔抗肽

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒5-氯噻吩-2-磺酰 97%甘草次酸(β型） 97%DLX4 (Dsital-less homebox4 isoformAlpha/ Beta)  末梢同源匡基因多肽片段

脂肪氧化酶检测试剂盒5-氯噻吩-2-磺酰氯 96%甘草酸  93%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)  海葵神经素（35肽）

乌头酸酶检测试剂盒2,2'-二硫二吡啶 98%染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Ala22)  海葵神经素（35肽）

辅酶M检测试剂盒二苄基硫 99%人参皂苷Rb3 分析标准品，≥98%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22)  海葵神经素（35肽）

蛋白激酶A检测试剂盒2,5-二溴 98%葡萄糖 CPShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22)  海葵神经素（35肽）

蛋白激酶A检测试剂盒2,5-二溴噻吩 96%牡荆素葡萄糖苷  98%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln9)  海葵神经素（35肽）

L-天冬氨酸氧化酶检测试剂盒4,4-二甲氧基-2-丁酮  95%猪去氧胆酸 98%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11)  海葵神经素（35肽）

腺苷酸环化酶检测试剂盒4,4'-二氨基二苯硫 98%橙皮素 97%rHBcAg  重组乙肝病核心抗原

AMP激活蛋白激酶检测试剂盒3,4-二溴噻吩 97%金丝桃素  96%rHBeAg(Hepatitis B Virus E Antigen protein)  重组乙肝病e抗原

精合酶检测试剂盒2,5-二氯噻吩 98%丹皮酚 99%rDen(rh-Dengue Virus)  多价重组人登革热病诊断抗原

鸟氨酸脱羧酶检测试剂盒2,4-二氟苯硫酚 97%靛蓝 98%rDen-2(rh-Dengue Virus)  重组人登革热病2型诊断抗原

精氨酸脱羧酶检测试剂盒3，4－二氟苯硫酚 96%异鼠李素 分析标准品，>98%（HPLC)rSLT/SLT-IIe(O139)(Shiga-Like Toxin Type II Variant)  重组猪水肿素蛋白（因子O139）

二氧化酶检测试剂盒2,3-二氯苯硫酚 97%靛玉红 95%ADM (Adrenomedullin)(22-52)  肾上腺髓质素（22-52）

琥珀酸半脱氢酶检测试剂盒2,4-二氯苯硫酚 97%异绿原酸A 分析标准品，99%ADM (Adrenomedullin)(22-42)  肾上腺髓质素（22-42）
禽脑脊髓炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒小鼠硒蛋白P(SEPP1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CASP7(Caspase-7) ELISA Kit8号染色体开放阅读框86抗体

小鼠脑信号素7A(SEMA7A)酶联免疫吸附测定试剂盒Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) ELISA Kit磷酸化分裂周期蛋白25B抗体

小鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(STK)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AMOT(Angiomotin) ELISA Kit磷酸化分裂周期蛋白25B抗体

小鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)酶联免疫吸附测定试剂盒Human APLN(Apelin) ELISA Kit磷酸化半胱酸蛋白酶蛋白6抗体

小鼠Sestrin 1蛋白 (SESN1) 酶联免疫吸附测定试剂盒Human GAS1(Growth arrest-specific protein 1) ELISA Kit9号染色体开放阅读框172抗体

小鼠Sestrin 2蛋白 (SESN2) 酶联免疫吸附测定试剂盒Human MASP2(Mannan-binding lectin serine protease 2) ELISA Kit磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂

小鼠Sestrin 3蛋白 (SESN3) 酶联免疫吸附测定试剂盒Human TFR2(Transferrin receptor protein 2) ELISA Kit表面趋化因子受体4相关蛋白2抗体