本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

操作流程:

收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

使用方法：

一、样品DNA的制备

用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。

二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。

3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。

4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。

5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。

6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。

7. NC管中不加任何阳性对照。

8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

环氧合酶1检测试剂盒L-赖氨酸乙酯 98%异恶唑草酮 分析标准品，99%Anti- Alpha -HCG/Gold  胶体金离子α 亚基人绒毛膜促性腺激素单抗 IgG

环氧合酶2检测试剂盒L-赖氨酸甲酯盐酸盐 98%苯氧菌酯 分析标准品，97%Anti- Beta-HCG/Gold  胶体金离子标记小鼠抗人β亚基人绒毛膜促性腺激素单抗IgG

核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶；加氧酶检测试剂盒N-碳苄氧基赖氨酸 98%春雷霉素 分析标准品，72.5%Anti-PSA /Gold  胶体金离子标记抗鼠抗人前列腺特异性抗原单克隆抗体(检测)IgG

线粒体呼吸链复合物V检测试剂盒L-亮氨酸甲酯盐酸盐 98%春雷霉素盐酸盐 分析标准品，95%Anti-TRF/Gold  金离子标记抗转铁蛋白抗体IgG

黄酮合成酶检测试剂盒D-赖氨酸盐酸盐 98%标准溶液100μg/ml,u=4%,溶剂:乙Anti-CD8/PE  荧光素藻红蛋白标记兔抗人、大、小鼠CD8抗体IgG

氨酸氨基转移酶检测试剂盒D-亮氨酸 99%标准溶液10μg/ml,u=4%,溶剂:乙Anti-VWF/PE  荧光素PE标记血管性血友病因子抗体IgG

天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒N(e)-Boc-L-赖氨酸 97%乳氟禾草灵 分析标准品，74%Anti-factor VIII/PE  荧光素PE标记第八因子相关抗原抗体IgG

过氧还蛋白检测试剂盒亮抑酶酞 ≥90% (HPLC虱螨脲 分析标准品，99.5%Anti-Annexin V/PE  荧光素PE标记兔抗人、大、小鼠、牛Annexin V抗体IgG

硫氧化还原蛋白检测试剂盒L-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐 98%甲基紫精 分析标准品，99%Anti-CD184/CXC-R4/PE  荧光素PE标记表面趋化因子受体4抗体IgG

NADP-苹果酸脱氢酶检测试剂盒D-亮氨酸甲酯盐酸盐 98%苯噻草 分析标准品，98.5%Anti-CD64/PE  荧光素PE标记免疫球蛋白G Fc段受体I

磷酸甘油脱氢酶检测试剂盒D-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐 98%甲磺隆 分析标准品，98%Anti-WBSCR14/ChREBP /FITC  荧光素标记糖类应答元件结合蛋白ChREBP抗体IgG

胆碱加氧酶检测试剂盒Boc-Lys(Boc)-ONp 97%甲磺隆标准溶液 100μg/ml,u=2%,溶剂:酮Biotin/HRP  辣根过氧化物酶标记生物素

脱镁叶绿酸a检测试剂盒Boc-Lys(Z)-OSu 98%甲磺隆标准溶液 10μg/ml,u=4% Avidin/HRP  辣根过氧化物酶标记亲合素

新黄质检测试剂盒N-(叔丁氧羰基)-D-赖氨酸  98%四聚乙 分析标准品，97%Goat Anti-human C3/HRP  辣根过氧化物酶标记羊抗人补体C3

紫黄质检测试剂盒N-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]-N'-[(2-烯氧基)羰基]-L-赖氨酸  95%异甲草 分析标准品，98.5%Goat Anti-human IgA/HRP  辣根过氧化物酶标记羊抗人IgA
黑曲霉染料法荧光定量PCR试剂盒小鼠Na-K-ATP酶(ATPase)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PRKCG(Protein kinase C gamma type) ELISA Kitγ干扰素诱导单核因子抗体

小鼠新生甲状腺素(NN-T4)酶联免疫吸附测定试剂盒Human NRGN(Neurogranin) ELISA Kit血小板因子4抗体

小鼠神经生长因子(NGF)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IFITM10(Interferon-induced transmembrane protein 10) ELISA Kit血小板趋化因子7蛋白抗体

小鼠神经粘附分子(NCAM/CD56)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IL2RG(Cytokine receptor common subunit gamma) ELISA Kit干扰素诱导T趋化因子抗体

小鼠神经丝蛋白(NF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human DSG3(Desmoglein-3) ELISA KitB-淋巴趋化因子抗体

小鼠脑红蛋白(NGB)酶联免疫吸附测定试剂盒Human NOX1(NADPH oxidase 1) ELISA Kit凋亡加强结构域蛋白12抗体

小鼠神经生长导向因子(Slit2) 酶联免疫吸附测定试剂盒Human LAD1(Ladinin-1) ELISA Kit凋亡加强结构域蛋白14抗体
实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR